刺客信条2 中的主角将扮演Ezio Auditor de Firenza，这是Borgia氏族骚乱期间的贵族。在第三人称的整个Slher中，我们将与夫妇的美第奇会面，我们将了解有关Leonardo da Vinci和Niccolo Machiavelli的更多详细信息。同时，我们的敌人将是Borgia，Francesco Pazzi和Girolamo Savonarola。戴斯蒙德·迈尔斯（Desmond Miles）的故事的延续落入了圣殿骑士的现代类似物的手中，发生在1476年至1499年的文艺复兴时期。
在这两个组织中，正在进行一场激烈的知识战。对象16绑架Desmonda，以便他学会更好地拥有自己的祖先并成为真正的刺客，而圣殿骑士只想抓住有关伊甸园的信息。
游戏的事件是基于父亲和兄弟的血腥仇恨。 Ezio小时候，他失去了父亲和兄弟，因为Pazzi如此想要 – 游戏的主要对手。 Ezio杀死了几乎整个Pazzi家族后，发现了下一个圣殿骑士的行动将在威尼斯举行，他们打算执行权力并寻找伊甸园的派对。开发人员为玩家添加了一些创新。例如，现在刺客可以潜入水中并在那里游泳直到健康结束。我们还可以从敌人的手中抓住武器。斯莱尔在战斗方面发生了很大变化，因此组合的数量发生了变化。
Orline Vision（刺客的主要优势）也遭受了变化。现在您使用了这种能力，周围的一切都合并为一个背景，并且对手被突出显示为黄色还是红色，具体取决于任务中是否有一些个性。我们的盟友用蓝色照亮，安全的庇护所或任务中物体可能是白色的地方。在开放的世界中，刺客可以在他想要的时候应对敌人。还完成了其他任务，以抽出我们的刺客并加深历史。 Ezio首次具有完美的可能性掌握您的知识和技能。